Анализ на гепатит C: иммуноблоттинг на антитела к белкам HCV в крови

Обновлено: 31.05.2024

Высокоспецифичное исследование, использующееся для верификации положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу гепатита С.

Метод позволяет выполнять раздельную оценку наличия специфических IgG антител к различным антигенам вируса гепатита С (структурным нуклеокапсидным: Cor-1 и Cor-2 и неструктурным: хеликаза, NS3, NS4, NS5). Используется в качестве подтверждающего исследования для уточнения неясных результатов скрининговых ИФА тестов, направленных на суммарную оценку наличия антител к вирусу гепатита С.

Первый шаг в лабораторной диагностике гепатита С - скрининговое исследование на наличие специфических антител к вирусу методом иммуноферментного анализа (ИФА) (см. тест № 79 ). Положительный результат теста на антитела, полученный при первичном тестировании, подлежит обязательной перепроверке в дополнительных более специфичных исследованиях, чтобы исключить ненужные медицинские исследования и лишние психологические травмы. Этот тест, как и другие ИФА-тесты, может иногда давать ложноположительный результат вследствие перекрёстных реакций и неспецифического связывания, определяющихся индивидуальными особенностями сыворотки пациента. Технологии скрининговых и подтверждающих тестов в разных лабораториях часто различаются, в некоторых случаях результаты, полученные в разных лабораториях, расходятся. При выявлении у обследуемого человека антител к вирусу, которые могут присутствовать в крови как при текущей инфекции, так и после выздоровления, далее наиболее важно, в клиническом плане, подтвердить или исключить текущую инфекцию. Для этого служат ПЦР-тесты, выявляющие РНК вируса в крови (см. тесты № 321 и № 323 ).

Положительный результат ПЦР-тестирования означает присутствие вируса гепатита С в крови, дополнительное определение генотипа вируса (см. тест № 324 ) помогает определить тактику лечения пациента. Отрицательный результат ПЦР-теста говорит об отсутствии вируса в крови в момент взятия пробы, что может быть как в случае, если инфицирования данным вирусом не было, так и в случае избавления от вируса после инфекции в прошлом (спонтанно или в результате лечения) или временного подавления репликации вируса.

Поэтому в случаях, когда результат теста на антитела положителен, а результат ПЦР-теста на РНК вируса отрицателен, человек рассматривается как потенциально инфицированный, и в этих ситуациях особенно важно, в том числе и психологически, убедиться в достоверности результатов определения антител.

Верифицировать результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает высокоспецифичное развёрнутое исследование антител методом иммуноблота, которое позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные против определённых структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С, имеющих разную значимость.

Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем, начиная с 3 - 4 недели инфекции - период появления в крови специфических антител.

  1. «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка очень мала;
  2. иммуносупрессированные пациенты;
  3. новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина связанная с антителами матери).

Подтверждение инфекции вирусом гепатита С в этих ситуациях возможно лишь положительным результатом при повторных исследованиях вирусной РНК методом ПЦР.

Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи. С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь >>.

  • Подтверждение положительных или сомнительных результатов, полученных при скрининговом исследовании антител к вирусу гепатита С.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Способ представления результата: на бланке результата отражен результат выявления антител к используемым антигенам, раздельно для Cor-1 и Cor-2, хеликаза, NS3, NS4, NS5 (отрицательный/сомнительный/положительный). Выдаётся общее заключение, сделанное на основании комплексной оценки результатов. Отрицательный результат иммуноблота: человек не был инфицирован вирусом гепатита С (результат скрининговых ИФА тестов - ложноположительный).

  1. «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка еще очень мала;
  2. иммуносупрессированные пациенты;
  3. новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина связанная с антителами матери).

В этих случаях подтверждение инфекции вирусом гепатита С возможно только с помощью повторных ПЦР-исследований.

Положительный результат иммуноблота: была инфекция вирусом гепатита С. Сомнительный результат: возможно, была инфекция вирусом гепатита С.

Метод определения Метод иммуноблота (технология рекомбинантный Line Blot).

Первый шаг в лабораторной диагностике гепатита С - скрининговое исследование на наличие специфических антител к вирусу методом иммуноферментного анализа (ИФА) (см. тест № 79 ). Положительный результат теста на антитела, полученный при первичном тестировании, подлежит обязательной перепроверке в дополнительных более специфичных исследованиях, чтобы исключить ненужные медицинские исследования и лишние психологические травмы.

Этот тест, как и другие ИФА-тесты, может иногда давать ложноположительный результат вследствие перекрёстных реакций и неспецифического связывания, определяющихся индивидуальными особенностями сыворотки пациента. Технологии скрининговых и подтверждающих тестов в разных лабораториях часто различаются, в некоторых случаях результаты, полученные в разных лабораториях, расходятся. При выявлении у обследуемого человека антител к вирусу, которые могут присутствовать в крови как при текущей инфекции, так и после выздоровления, далее наиболее важно, в клиническом плане, подтвердить или исключить текущую инфекцию. Для этого служат ПЦР-тесты, выявляющие РНК вируса в крови (см. тесты № 321 и № 323 ).

Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.
С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь >>.

Интерпретация результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Способ представления результата: на бланке результата отражен результат выявления антител к используемым антигенам, раздельно для Cor-1 и Cor-2, хеликаза, NS3, NS4, NS5 (отрицательный/сомнительный/положительный). Выдаётся общее заключение, сделанное на основании комплексной оценки результатов.

Отрицательный результат иммуноблота: человек не был инфицирован вирусом гепатита С (результат скрининговых ИФА тестов - ложноположительный).

Положительный результат иммуноблота: была инфекция вирусом гепатита С.
Сомнительный результат: возможно, была инфекция вирусом гепатита С.

На сайте указан максимально возможный срок выполнения исследования. Он отражает время выполнения исследования в лаборатории и не включает время на доставку биоматериала до лаборатории.

Номенклатура МЗРФ (Приказ №804н): A26.06.041.002.02 Определение суммарных антител классов M и G (anti-HCV IgG и anti-HCV IgM) к вирусу гепатита C (Hepatitis C virus) методом иммуноблоттинга в крови, подтверждающий тест

Подготовка к исследованию

Специальной подготовки к исследованию не требуется. Взятие крови проводится натощак или не ранее, чем через 4 часа после необильного приема пищи. Допустимо пить чистую не минеральную и не газированную воду. Чай, кофе, сок запрещаются.

Описание

Лабораторная диагностика вирусного гепатита С основана на совокупности выявления серологических маркеров заболевания и определения РНК вируса в крови.
Первичным (скринингом) исследованием для диагностики заболевания является определение в крови пациента суммарных антител IgG и IgM, выработка которых происходит в результате взаимодействия организма с антигенами вируса гепатита С. И, если, антитела к вирусу гепатита отсутствуют, дополнительного исследования пациенту, как правило не требуется; но в случае выявления в крови пациента суммарных антител IgG и IgM необходимо проведение подтверждающих исследований, которые позволят дифференцировать. Наличие антител носит характер перенесенной в прошлом инфекции, или в данном случае имеется текущее заболевание; так же проведение подтверждающего исследования показано в случае «сомнительного» результата исследования на выявление суммарных антител, когда невозможно однозначно трактовать выявлены антитела или нет.
В качестве одного из подтверждающих исследований используется более специфичный метод иммуноблотинга Western-blot, позволяющий исключить ложноположительные реакции в исследовании. Метод иммуноблотинга основан на реакции встречной преципитации в геле антител к структурным Аnti-Core 1, Anti-Core2, и неструктурным белкам вируса гепатита С (Anti-NS3, Anti-NS4, Anti-NS5 Anti-Helicase).
Гепатит С инфекционное заболевание, возбудителем является РНК содержащий вирус, относящийся к семейству Flaviviridae. Вирус имеет несколько генотипов, определение которых очень важно для выбора схемы противовирусной терапии и длительности лечения.
Единственный источник инфекции - человек, который болеет острой или хронической формой гепатита. Заражение возможно при переливании инфицированной крови или плазмы, при проведении трансплантации инфицированных органов; проведение гастроскопии, стоматологические манипуляции, использование нестерильных игл и инструментария для осуществления татуировок и пирсинга. Так же возможно заражение при половом контакте, и внутриутробное заражение ребенка от инфицированной матери, но эти пути заражения встречаются реже. Инкубационный период колеблется от 2 недель до 26 недель, его длительность зависит от индивидуальных особенностей иммунной системы организма. Основная опасность заболевания в том, что гепатит может длительное время протекать бессимптомно, не зря это заболевание называют «ласковый убийца. Лишь у 15 % пациентов заболевание проходит в острой форме с выраженной симптоматикой и сопровождается с желтушным окрашиванием кожных покровов и слизистых оболочек, моча становится насыщенно - темного цвета, а стул, наоборот, светлеет, так же у пациентов могут быть выраженная слабость, общее недомогание. У 85% пациентов заболевание переходит в хроническую форму и без лечения приводит к развитию цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциноме.

Показания к назначению

Диагностика гепатита С в случае положительного результата исследования на выявление суммарных антител к вирусу гепатита (скрининга).

Интерферирующие факторы

Причины отклонения показателей от нормы (повышенные значения)

В результате исследования указывается определение антител к используемым антигенам в отдельности Anti-NS3, Anti-NS4, Anti-NS5-неструктурные белки, Аnti-Core 1, Anti-Core2 -структурные белки, Anti-Helicase, и на основании комплексной оценки антител к белкам интенсивностью +1 , к двум и более антителам вируса гепатита С формируется заключение.
Положительный результат -инфицирование вирусом гепатита С. В случае положительного результата иммуноблотинга рекомендовано определение вирусной РНК методом ПЦР( количественное и качественное определение вируса в крови, генотипирование вируса) поскольку необходима дальнейшая верификация диагноза. В случае отрицательного исследования ПЦР, но при положительном исследование иммуноблотинга , необходимо повторное исследование для подтверждения хронического характера инфекции, либо окончательной верификации диагноза.

Причины отклонения показателей от нормы (сниженные значения)

Отрицательный результат - отсутствие антител к вирусу гепатита С. Но в данном случае необходимо учитывать состояние « диагностического окна» в во время инкубационного периода и ранней фазы острой инфекции , в связи с тем, что в указанные периоды циркулирует незначительное количество вируса и данной виремии недостаточно для формирования иммунного ответа. В указанных случаях наступление сероконверсии возможно только через несколько месяцев. Так же у пациентов с иммунодефицитными состояними, у новорожденных с перинатальной инфекцией возможно изменение картины иммунного ответа, в данных случаях для окончательной верификации диагноза необходимо проведение исследования с помощью полимеразно- цепной реакции.
Сомнительный результат иммуноблотинга может быть выявлен в периоде сероконверсии, при наличии хронической патологии ( аутоиммуные заболевания, иммунодефицитные состояния), в данном случае необходимо повторное исследование с проведение подтверждающего теста методом ПЦР для окончательной верификации диагноза. Это обусловлено тем, что у большинства пациентов с «сомнительным» результатом исследования впоследствии выявляется РНК вируса гепатита С.

Читайте также: