Иммуногистохимические исследования опухоли. Иммуносорбция в диагностике опухоли.

Обновлено: 03.05.2024

Исследование клеток ткани, которое проводится с помощью специальных реактивов.

Синонимы русские

ИГХ, иммуногистохимия, иммуногистохимический анализ.

Синонимы английские

Immunohistochemistry, IHС, immunohistochemical analysis.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Образец ткани / образец ткани в парафиновом блоке.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Общая информация об исследовании

Иммуногистохимическое исследование клинического материала проводится в целях выявления в нем искомых веществ. Готовые гистологические препараты обрабатываются специальными реактивами, содержащими меченые специфические антитела к выявляемому веществу, которое в данной ситуации служит антигеном. Если искомое вещество находится в исследуемом материале, то антитело связывается с его определенными участками. В результате этого между ними образуется комплекс и происходит окрашивание ткани.

Данный метод используется в диагностике различных патологических состояний, особенно велика его роль в области онкологии. Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование помогает не только диагностировать опухоль, определить ее нозологический вариант, выявить первичный опухолевый очаг и обнаружить раковое перерождение клеток, но также спрогнозировать варианты течения заболевания и успешность лечения. К факторам, влияющим на прогноз, относятся рецепторы к эстрогенам и к прогестерону, Ki-67 (маркер активности опухоли), her-2 neu (эпидермальный фактор роста, определяет чувствительность опухоли к химиопрепарату трастузумабу/герцептину), VEGF (сосудистый фактор роста), Bcl-2, р53 и др. В отличие от иммуногистохимического анализа, их невозможно определить при обычном гистологическом исследовании.

Также этот метод нашел применение в диагностике системных заболеваний соединительной ткани и болезней почек, позволяет выявлять бактерии и вирусы в изучаемых тканях, например вирус Эпштейна - Барр, папиллома-вирус, Helicobacter Pylori (у больных хроническим гастритом), микобактерии при диагностике туберкулеза и др.

На основе ИГХ-анализа врач получает заключение с положительными и отрицательными маркерами, и это помогает подтвердить или опровергнуть гипотезу других клинико-лабораторных исследований.

Рак шейки матки относится к наиболее распространенным видам рака у женщин. Эпидемиологические и лабораторные данные подтверждают роль человеческого папиллома-вируса (ВПЧ, HPV) в качестве запускающего агента для подавляющего большинства предраковых и злокачественных поражений эпителия слизистой оболочки шейки матки. При этом ДНК ВПЧ могут быть обнаружены в 95-100% всех случаев.

Вирус папилломы человека представляет собой небольшие циркулярные двухцепочечные вирусы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), принадлежащие к семейству Papillomaviridae. Известно более 130 типов ВПЧ. Они классифицируются по степени риска, основанного на их связи с цервикальной карциномой. ВПЧ 16 и 18 являются наиболее часто встречающимися типами высокого риска. Внедряясь в эпителиальные клетки, вирус вызывает в них дефекты генов, тем самым способствуя развитию опухоли. При помощи ИХГ легко обнаружить в клетках, пораженных HPV, экспрессию белков p16 и p18, и их позитивность сильно коррелирует с позитивностью HPV. Это помогает различить неопухолевую дисплазию (как результат воспаления) и опухолевую (вызванную вирусом папилломы и способную переродиться в рак), а также позволяет провести дифференциальную диагностику дисплазии умеренной и высокой степени тяжести (CIN II/III) и начальных форм рака шейки матки, выявление поражений, склонных к прогрессированию и развитию инвазивной карциномы. В дисплазиях умеренной и высокой степени (в 80-100% случаев CIN II и практически во всех случаях CIN III) и инвазивном раке шейки матки определяется усиленная экспрессия белка p16, и она усиливается по мере нарастания тяжести поражения.

У женщин с плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями низкой степени тяжести очаговая и диффузная экспрессия свидетельствует о прогрессировании заболевания. Отсутствие или очаговая экспрессия p16 в поражениях высокой степени может служить дополнительным признаком благоприятного течения патологического процесса.

Применяется иммуногистохимическое исследование и при дифференциальной диагностике целиакии.

Целиакия - это системное заболевание, обусловленное генетической непереносимостью глютена или соответствующих проламинов, которые содержатся в семенах злаков. Характеризуется данная патология повреждением слизистой оболочки тонкой кишки (развитием атрофической энтеропатии), появлением в сыворотке крови специфических антител и широким спектром глютензависимых клинических проявлений. Заболевание встречается в два раза чаще среди женщин, чем среди мужчин, может впервые проявиться как в детстве, так и у взрослых. Целиакия может протекать с ярко выраженной или со стертой клинической картиной, а также без гастроэнтерологической симптоматики. Чаще всего встречается стертый вариант течения заболевания, поэтому диагностика глютеновой энтеропатии (ГЭ) затруднена.
На первичном лабораторном этапе проводится серологическое исследование, определяющее в крови специфические биомаркеры. Лицам с положительными результатами показана эндоскопия тонкой кишки с биопсией и последующим гистологическим и ИГХ анализом взятого материала.

Известно, что целиакия сопровождается повышением числа лимфоцитов внутри эпителиальных клеток тонкой кишки. При этом отличительной особенностью является то, что большинство интраэпитиальных лимфоцитов (ИЭЛ) несут на своей поверхности специфический Т-клеточный рецептор (CD3 γ и CD3δ-положительные клетки). Чем активнее протекает заболевание, тем больше ИЭЛ. Эта особенность используется при проведении иммуногистохимического исследования, позволяющего определить преобладающий тип лимфоцитов. Особенно важен этот анализ, когда существует расхождение между данными серологического исследования и гистологической оценкой на стандартных участках.

Для чего используется исследование?

Для определения вида и подвида опухоли, степени ее злокачественности и распространенности онкологического процесса;
для дифференциальной диагностики пролиферативных заболеваний;
для определения этиологического фактора, вызвавшего изменения в клетках;
для подбора эффективной терапии;
для оценки пролиферативной активности клеток опухоли;
для оценки эффективности лечения;
для диагностики рецепторного статуса при онкологическом заболевании (например, раке молочной железы, предстательной железы);
для определения первичного очага опухоли;
для выявления злокачественного потенциала пораженных клеток;
для первичного отбора пациентов для диспансерного учета и дальнейшего обследования;

Когда назначается исследование?

При дифференциальной диагностике дисплазии (высокой и умеренной степени) и начальной стадии рака шейки матки;
при раке молочной железы, желудка, предстательной железы в целях определения чувствительности к различным видам терапии;
при определении степени злокачественности и оценки прогноза заболевания;
при оценке эффективности терапии;
при поиске источника метастазов;
при диагностике гастроинтестинальных стромальных опухолей (GIST) с помощью расширенной панели антител, включающей DOG1;
при диагностике нейроэндокринных опухолей;
при дифференциальной диагностике целиакии, сопровождающейся неясной гистологической картиной;
при расхождении результатов серологического исследования и гистологической оценки.

Что означают результаты?

Диапазон значений индивидуален для каждого заболевания, зависит от используемых антител.

Расшифровка результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом.

Проводится морфологическая оценка препарата (опухоли классифицируются согласно ВОЗ), дается описательный ответ с указанием оценки экспрессии антитела. ИХГ всегда следует использовать в качестве дополнения к морфологическому исследованию, результаты не следует интерпретировать изолированно.

Что может влиять на результат?

При некоторых заболеваниях есть факторы, которые могут влиять на результат. Так, при диагностике целиакии назначение безглютеновой диеты до исследования может приводить к получению ложноотрицательного результата.

Иммуногистохимия является дополнительным методом исследования, применяемым в патологической анатомии при диагностике доброкачественных и злокачественных новообразований, когда постановка диагноза по гистологическим препаратам не представляется возможной или требуется уточнение клинически важных молекулярных параметров опухоли.

Данная методика основана на выявлении в анализируемом образце ткани белков, специфичных для того или иного вида клеток, что позволяет отличать один вид опухоли от другого, а также выявлять маркеры, отвечающие за лекарственную чувствительность опухолевой ткани.

Зачем нужна иммуногистохимия, если уже сделано гистологическое исследование?

В ряде случаев проведения обычного гистологического исследования биопсии бывает недостаточно, что объясняется следующими причинами:

опухоль имеет крайне неспецифичное микроскопическое строение, которое не позволяет поставить окончательный диагноз.

Например, диагноз практически всех лимфом и лейкозов (более 70 видов!) ставится после ИГХ исследования, а в части случаев дополнительно требуется молекулярно-генетическое исследование; в свою очередь, за гистологическим диагнозом «мелкокруглоклеточная опухоль» может скрываться до 13 различных злокачественных опухолей, каждая из которых имеет свой прогноз и требует индивидуального плана химиолучевого лечения - единственным методом, способным помочь врачу в дифференцировании этой группы опухолей, является ИГХ исследование.

Сроки выполнения ИГХ исследования

В соответствии с п.24 Приказа №179н от 24.03.2016 г. Минздрава России, срок выполнения ИГХ исследования:

Иммуногистохимические исследования опухоли. Иммуносорбция в диагностике опухоли.

В зависимости от цели иммуноморфологическое исследование может быть направлено на выявление опухолевых антигенов или антигенов, общих с исходной нормальной тканью. В последние годы широкое распространение получили иммуногистохимические исследования, ставящие целью обнаружение в опухолевых клетках определенных ферментов, гормонов, биогенных аминов, продуктов секреции, т. е. веществ, по которым можно составить представление о специальной функции клетки и, следовательно, высказаться о ее природе.

Определение продуктов специализированного синтеза, осуществляемого клетками опухоли, также осуществляется с помощью антисывороток к соответствующим маркерам. В последнем случае их используют в качестве гаптенов будущий маркер сначала присоединяют к несущей белковой или полипептидной молекуле, после чего путем иммунизации животного таким коиъюгнрованкым антигеном получают антисыворотку, содержащую антитела против данного маркера.
Методы иммуногистохимии широко применяются для верификации и определения функциональной активности эндокринных опухолей и опухолей APUD-системы.

В настоящее время иммуноморфологический метод нашел применение при изучении эпителиальных, соединительнотканных, миогенных и нейрогениых опухолей, т. е. опухолей любой тканевой принадлежности. Центральное место в иммуноморфологнческом изучении злокачественных новообразований занимает выяснение тканевой принадлежности опухоли и степени ее диффереицировки. Помимо теоретической значимости, знание гистогенеза и уровня дифференцированности новообразования имеет большое практическое значение для определения прогноза и выбора адекватного лечения.

Верификация гистогенеза опухоли с помощью иммуноморфологического метода является прямым продолжением насущных задач гистологической диагностики, в ряде случаев не дающей достаточных ориентиров для суждения о тканевом источнике новообразования. Особенно справедливо это для малодифференцнрованных мягкотканных опухолей, клеточно-волокнистая структура которых позволяет предполагать как соединительнотканную, так и миогенную природу опухоли. Именно поэтому успешные попытки иммуноморфологической верификации гистогенеза были впервые осуществлены в отношении мягкотканных опухолей, а именно в диагностике рабдомиосарком и гладкомышечных образований.

Дальнейшее совершествование приемов иммуносорбции и, в частности, использование перекрестной иммуносорбции позволило получить моноспецифические сыворотки против цитоплазматического и структурного миозина и использовать иммуноморфологический метод для выявления миофибробластов в десмоидах, т. е. для изучения плюрипотентности опорных клеток соединительной ткани и направленности клеточной дифференцировки.

В исследованиях, ставящих задачей теоретические аспекты онкогенеза, иммуноморфологический метод используется для определения уровня дифференцировки. Так, с помощью антисывороток против а-фетопротеина, лигандина и А-белка, служащих маркерами определенных стадий нормального развития печени крыс, показано, что низкодифференцированные трабекулярные карциномы печени крыс соответствуют ранним стадиям формирования печени, клетки высокодифференцированных карцином — гепатоцитам молодых животных с 6-го по 14-й день жизни, а умеренно дифференцированных — промежуточным стадиям нормального развития.

Эти данные указывают на определенную связь морфологической, биохимической и антигенной дифференцировки опухолевых клеток, они являются вполне объективными критериями и, по-видимому, могут быть взяты за основу при проведении аналогичных исследований по определению степени дифференцировки опухолей различного гистогенеза.

Этапность дифференцировки фибробластов, отражающаяся в гетерогенности синтезируемого ими коллагена, удачно использована для иммуноморфологнческого изучения десмондов. Применение меченых антисывороток против различных типов коллагена позволило разграничить абдоминальные и эстраабдоминальные десмоиды по типам синтезируемого коллагена и объяснить более агрессивное поведение последних относительной функциональной незрелостью пролифернрующих фибробластов, которые синтезируют преимущественно коллаген III типа. Ценность иммуноморфологического исследования очевидна, так как гистологическое строение абдоминальных и экстраабдомннальиых десмоидов идентично и не дает возможности объяснить особенности клинического течения экстраабдоминальных десмоидов (их рецидивирующий характер роста и преобладание в молодом возрасте).

В свете полученных иммуноморфологических данных, экстраабдоминальные десмоиды, по-видимому, следует рассматривать как менее дифференцированные фиброматозы.

Тканеспецифические антигены, позволяющие документировать тканевую принадлежность той или иной структуры, широко используются при изучении гистогенеза опухолей. Так, вопрос о происхождении гастроинтестинальных карциноидов из эндокринных клеток собственной пластинки слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта получил новое подтверждение на основе иммуноморфологнческого выявления в карциноидах и клетках-предшественниках, предполагаемых в качестве их гнстогенетического источника, цитокератина — тканеспецифического маркера эпителия.

Иммунопероксидазным методом цитокератин обнаружен в эндокринных клетках, локализующихся как в собственной пластинке (стромальные эндокринные клетки), так и в эпителиальном слое (эндокринные клетки эпителиальной выстилки) слизистой оболочки. Это дало основание авторам исследования рассматривать стромальную эндокринную клетку как клетку, мигрировавшую в строму из эпителиального покрова. Одновременно выявление в клетках карциноидов, стромальных и эпителиальных эндокринных клетках слизистой оболочки энолазы — специфического маркера нервной ткани указывает на нейроэктодермальную природу эндокринных клеток желудочно-кишечного тракта и, соответственно, на нейроэктодермальиое происхождение карциноидов.

В настоящее время иммуноморфологический метод нашел применение для выявления миофибробластов при дисгормональных дисплазиях, доброкачественных опухолях и раке молочной железы. Имеются попытки использовать эпидермальный кейлон — специфический эпидермальный антиген в качестве маркера плоскоклеточной дифференцировки нормального и опухолевого эпителия Мурамидаза (лизоцим) предложена в качестве надежного маркера опухолей гистиоцитарной природы. Глиальные опухоли (астроцитомы) верифицируются иммуногистохнмически выявлением глиального фибриллярного белка.

Широкие возможности иммуноморфологический метод открыл для разграничения гормонально активных и гормонально неактивных опухолей эндокринной природы. Уже этот далеко не полный перечень показывает, что опыт использования иммуноморфологнческого метода в онко-морфологии оказался плодотворным, перспективы — многообещающими, а возможности — безграничными.

Следует надеяться, что делом ближайшего будущего станет организация лабораторно-промышленного выпуска меченых специфических сывороток против различных тканевых и клеточных маркеров. В этом залог дальнейшего развития иммуиоморфологии вообще и иммуноморфологии в частности.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Читайте также: