Респираторный микоплазмоз: выявления антигена Mycoplasma pneumoniae
Обновлено: 17.06.2024
Определение ДНК Mycoplasma pneumoniae в плазме крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».
Микоплазмы играют значительную роль в возникновении ряда заболеваний человека. В настоящее время известны около 40 видов семейства Mycoplasmataceae. Человек является естественным хозяином, по крайней мере, 15 видов микоплазм. Среди них ведущую роль в развитии заболеваний органов дыхания играет M. pneumoniae. Однако микоплазма пневмония способна поражать не только дыхательную систему. Описаны неврологические, дерматологические, желудочно-кишечные нарушения, напрямую или косвенно вызванные инфицированием этим микроорганизмом. M. pneumoniae является высоковирулентным возбудителем, поражающим в первую очередь дыхательную систему. Заражение происходит воздушно-капельным путем, источником является инфицированный человек. Как при естественном, так и при экспериментальном заражении после инкубационного периода продолжительностью от 3 до 11 дней заболевают 40-90% пациентов. Невосприимчивые к микоплазме пациенты выделяют возбудитель и могут служить источником инфекции в течение нескольких недель. У них закономерно формируется рост титра антител без клинических симптомов заболевания. Формирующийся к микоплазме пневмония иммунитет нестоек. Наиболее часто M. pneumoniae поражает верхние и нижние дыхательные пути. Респираторный микоплазмоз очень распространен в популяции людей и обычно составляет 10-16% всех случаев острых респираторных заболеваний (ОРЗ). В период эпидемических вспышек доля M. pneumoniae в этиологической структуре острых инфекций органов дыхания может составлять 30-40%. Отмечено, что респираторный микоплазмоз характеризуется определенными возрастными особенностями. Наибольшая заболеваемость микоплазменными инфекциями отмечается у детей школьного возраста.
Нередко (особенно у детей школьного возраста и молодых людей) инфекционный процесс в верхних дыхательных путях распространяется на терминальные отделы респираторного тракта, приводя к развитию пневмонии. Частота легочных микоплазмозов может значительно варьировать в зависимости от эпидемиологической ситуации: во время подъемов заболеваемости частота микоплазменных пневмоний достигает 35%, а в периоды эпидемиологического благополучия составляет лишь 2-6% от общего числа пневмоний. У детей и подростков 5-17 лет микоплазменная пневмония может составлять до 45% всех пневмоний. Долгое время из-за сложности культивирования диагностика микоплазменной инфекции была возможна только в условиях специализированных лабораторий. Разработка и оптимизация новых высокочувствительных методов, таких как ПЦР и иммуноферментный анализ, способствовали прогрессу в изучении данной проблемы.
- определяемый фрагмент - специфичный участок ДНК Mycoplasma pneumoniae;
- специфичность определения - 100%;
- чувствительность определения - 100 копий в пробе.
Специальной подготовки к исследованию не требуется. С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь >>.
Диагностика инфекций, вызванных Mycoplasma pneumonia.
Возбудителем респираторного микоплазмоза является Mycoplasma pneumoniae - представитель класса Mollicutes, объединяющего бесстеночные, способные к автономному существованию бактерии, по уровню структурной организации занимающие промежуточное положение между бактериями и вирусами. Респираторный микоплазмоз - распространенное антропогенное заболевание. Особенностью респираторного микоплазмоза является периодичность эпидемий с интервалами, по данным разных источников, варьирующими от 3 до 7 лет. Распространению инфекции способствует частота и длительность контактов среди лиц, пребывающих в закрытых и полузакрытых коллективах (военнослужащие, школы-интернаты), особенно при их формировании. В 3-10% случаев микоплазменной инфекции рентгенологически диагностируется пневмония. В 1-5% случаев заболеваний респираторным микоплазмозом требуется госпитализация. Микоплазменная пневмония сопровождается частым мучительным и продолжительным кашлем со скудной вязкой мокротой, которая плохо эвакуируется, отмечаются боли в грудной клетке, может развиться обструкция бронхов. Диагностика микоплазменной пневмонии только на основании клинических или рентгенологических данных невозможна, поскольку не имеет патогномонических черт. Основная роль в подтверждении микоплазменной этиологии пневмонии отводится лабораторной этиологической диагностике. Для этиологической диагностики микоплазменной пневмонии применяют: обнаружение ДНК М. pneumoniae методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (ПЦР-РВ); выявление антигена микоплазм в реакции прямой иммунофлуоресценции (РИФ); серологические исследования по обнаружению специфических антител класса IgM и IgG к M. pneumoniae в сыворотках крови методом иммуноферментного анализа (ИФА). Mycoplasma pneumoniae относится к трудно культивируемым микроорганизмам.
С целью быстрой этиологической диагностики пневмонии рекомендуется использовать ПЦР при исследовании биологического материала, полученного из нижних дыхательных путей (мокрота при глубоком откашливании, аспираты из трахеи, мокрота, полученная в результате индукции посредством ингаляции гипертонического раствора натрия хлорида, жидкость бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ), получаемая с помощью фибробронхоскопии. При получении положительного результата ПЦР при исследовании биологического материала, полученного из нижних дыхательных путей, этиология пневмонии считается установленной. При невозможности получения биологического материала из нижних дыхательных путей для ПЦР допустимо использовать мазки из верхних дыхательных путей (объединенный мазок из носоглотки и задней стенки глотки), и при получении положительного результата следует считать этиологию пневмонии предположительно установленной.
Диагностика инфекций, вызванных Chlamydophila pneumoniae.
Chlamydophila pneumoniae- патогенная для человека грамотрицательная бактерия с облигатным внутриклеточным типом паразитирования, обладает тропизмом к клеткам столбчатого цилиндрического эпителия слизистых оболочек человека, в частности, к эпителию бронхиол, бронхов, а также к альвеолярным макрофагам, моноцитам. Для C. pneumoniae-инфекции характерна генерализация процесса, вследствие чего возбудитель может инфицировать эндотелиальные клетки сосудов, синовиальные клетки, гепатоциты и ткани нервной системы.
С. pneumoniae вызывает пневмонии различной тяжести, длительно протекающие бронхиты, фарингиты, синуситы. Пневмония, вызванная С. pneumoniae обычно имеет благоприятное течение, в редких случаях течение очень тяжелое. Микст-инфекция, например сочетание с пневмококком или наличие тяжелых сопутствующих заболеваний, особенно у пожилых лиц, осложняет течение заболевания и увеличивает риск летального исхода. Нередко инфекция протекает малосимптомно. В группу риска попадают все возраста, но частота заболеваемости хламидийной пневмонией выше у детей школьного возраста. Заболеваемость среди мужчин выше, чем среди женщин. Эпидемические вспышки происходят каждые 4-10 лет.
Наиболее специфичным и чувствительным методом выявления возбудителя является ПЦР- диагностика в реальном времени (ПЦР-РВ). Высокая чувствительность и отсутствие ложноположительных результатов могут быть обеспечены использованием только лицензированных наборов для эффективного выделения ДНК из клинического материала и наборов для постановки ПЦР современного поколения на основе ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ).
При получении положительного результата ПЦР при исследовании биологического материала, полученного из нижних дыхательных путей, этиология пневмонии считается установленной. Однако при пневмониях, вызванных Chlamydophila pneumoniae, кашель часто бывает непродуктивным, в таких случаях для ПЦР рекомендуется использовать мазки из верхних дыхательных путей (объединенный мазок из носоглотки и задней стенки глотки), и при получении положительного результата следует считать этиологию пневмонии предположительно установленной.
Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК, полученные из образцов следующего материала: мокроты (либо аспиратов из трахеи), промывных вод бронхов, бронхо-альвеолярного лаважа, мазков со слизистой нижнего носового хода и задней стенки ротоглотки, секционного материала, цельной крови.
Взятие мазков со слизистой нижнего носового хода
Мазки берут сухим стерильным назофарингеальным велюр-тампоном на пластиковом аппликаторе. Если полость носа заполнена слизью, перед процедурой рекомендуется провести высмаркивание. Зонд вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину до носоглотки, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа.
После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с тампоном) помещают до места слома в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков. Конец зонда отламывают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают и маркируют.
Взятие мазков из ротоглотки
Мазки из ротоглотки берут сухими стерильными зондами с вискозными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки.
После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с вискозным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков. Конец зонда отламывают, придерживая крышкой пробирки с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть пробирку. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают и маркируют.
Допускается хранение клинического материала до проведения исследования в течение 3 суток при температуре от 2 до 8 °С или 1 неделю при температуре не выше минус 16 °С.
Мокрота или аспират из трахеи
Мокроту собирают в стерильные герметичные одноразовые пластиковые контейнеры, после предварительного полоскания полости рта водой. Аспираты из трахеи получают традиционным способом и помещают в стерильные герметичные одноразовые пластиковые контейнеры.
Бронхо-альвеолярный лаваж (БАЛ) или промывные воды бронхов (ПВБ) собирают в одноразовые плотно завинчивающиеся емкости из полипропилена (во избежание адгезии клеток на внутренней поверхности емкости) объемом не менее 5 мл.
Допускается хранение вышеперечисленного материала до проведения исследования в течение 1 суток при температуре от 2 до 8 °С или 1 неделю при температуре не выше минус 16 °С.
Секционный материал помещают в стерильные одноразовые контейнеры и замораживают сразу после взятия либо исследуют в течение 1 ч. Дальнейшее хранение материала возможно в течение года при температуре не выше минус 68 °С. Допускается однократное замораживание-оттаивание материала.
Цельную кровь собирают в пробирки типа Vacuette с раствором или напылением ЭДТА. Закрытую пробирку с материалом несколько раз переворачивают, чтобы перемешать консервант. Для анализа используют цельную кровь, собранную у пациента утром натощак, без предварительной подготовки.
Внимание! Данный материал не используется для диагностики ОРЗ.
Новый буклет «Серологические маркеры онкологических заболеваний». Подробнее
Новые наборы для ИФА-диагностики инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных. Подробнее
Изменения в наборе SARS-CoV-2-IgG количественный-ИФА-БЕСТ (серия 5, 6). Подробнее
Новые наборы для выявления антигена SARS-CoV-2. Подробнее
На нашем YouTube-канале опубликована серия видео по ИФА-диагностике респираторных инфекций. Подробнее
Mycoplasma pneumoniae-IgG-ИФА-БЕСТ
Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G к Mycoplasma pneumoniae.
Mycoplasma pneumoniae-IgM-ИФА-БЕСТ
Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса М к Mycoplasma pneumoniae.
Mycoplasma pneumoniae-IgA-ИФА-БЕСТ
Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса А к Mycoplasma pneumoniae.
Читайте также: